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河南农业大学,河南粮食作物协同创新中心,河南省水稻生物学重点实验室,郑州, 450046
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2021 年, 第 19 卷, 第 19 篇   
收稿日期: 2019年12月11日    接受日期: 2019年11月29日    发表日期: 2021年04月20日

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microRNA (miRNA)是长度为 18~25个碱基的非编码单链 RNA，在植物生长发育过程中起着重要的调节作用。水稻是世界上重要的粮食作物之一，近年来调控水稻生长发育的 miRNA不断被发掘，但目前关于 miR1866的研究还比较少。本研究通过构建 miR1866的 CRISPR/Cas9表达载体，创制 miR1866的突变体，挖掘水稻 miR1866的功能。依据 CRISPR/Cas9基因编辑技术，设计了 miR1866的突变靶点，通过人工合成的方法得到包含突变靶点的特异序列，经过磷酸化修饰和退火后与载体 SgRNA连接进而与 Cas9重组得到 miR1866的 CRISPR/Cas9表达载体，利用农杆菌介导法导入粳稻品种日本晴，获得转基因植株，结合测序结果判断转基因植株突变单株的突变基因型。本研究比较了野生型和突变体(KO1866-1-2和 KO1866-2-4)在相同培养条件下苗期的根长、株高、茎基粗、鲜重和干重，结果表明：在营养液培养条件下，突变体的株高、根长、茎基粗、鲜重和干重均显著低于野生型。据此推测，miR1866对水稻的生长发育有一定的调节作用。本研究利用 CRISPR/Cas9创制水稻 miR1866的突变体，对研究 miRNA调控途径，完善水稻 miRNA调控的分子机制具有重要的意义。
 

水稻； miR1866；CRISPR/Cas9；基因编辑；株高